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WB 化学发光成像仪操作步骤指南
WB 化学发光成像仪是生物学实验里的得力助手,熟练掌握其操作步骤,能让实验事半功倍。下面就为大家梳理WB 化学发光成像仪关键操作步骤流程:
实验前准备仪器预热:接通电源,打开化学发光成像仪开关,让仪器预热 15 - 30 分钟。如同运动员上场前的热身,预热能使仪器达到稳定工作状态,保障检测精度。
检查环境:确保操作环境清洁、干燥,室温维持在适宜范围,通常是 20 - 25℃ 。过湿、过热或过冷的环境,都可能干扰仪器性能,影响成像效果。
准备样本:提前完成蛋白质印迹(WB)实验,将含有目的蛋白的 PVDF 膜或 NC 膜,用镊子小心取出,去除多余的缓冲液,保证膜表面洁净,避免杂质干扰后续成像。
样本放置与参数设置放置膜:打开成像仪暗箱,将处理好的膜平整放置于成像平台中央,注意避免膜出现褶皱,不然会致使成像不均。轻轻合上暗箱,确保密封严实,防止外界光线进入。
参数设定:打开操作软件,依据实验需求与所使用的发光底物特性,调整曝光时间、灵敏度等关键参数。初次操作时,若拿捏不准,可先尝试较短曝光时间,后续按需增加,以防过度曝光让图像丢失细节。灵敏度设置要适配目标蛋白的预估含量,含量低就调高些,反之亦然。
图像采集与分析采集图像:点击软件中的 “开始采集” 按钮,成像仪即刻捕捉膜上的化学发光信号,并转化成数字图像显示于屏幕。采集过程保持安静,勿晃动仪器,不然成像易模糊。
图像优化:倘若初次采集的图像不够理想,例如背景过亮、蛋白条带不清晰,利用软件自带的对比度、亮度调节工具微调,凸显目标条带。
分析数据:运用软件的定量分析功能,框选目标蛋白条带,测量其灰度值、面积等数据,以此来对比不同样本间蛋白表达量的差异,为实验结论筑牢数据根基。
实验收尾关闭软件:完成图像采集与分析,先安全关闭操作软件,避免数据丢失或软件出错。
关闭仪器:关掉成像仪电源开关,拔下插头。清理暗箱,擦拭平台,为下次实验营造良好开端。
只要遵循上述步骤,就能顺利驾驭 WB
化学发光成像仪,助力科研探索。