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超微量分光光度计使用方法
超微量分光光度计是一种常用于测量生物样品中蛋白质浓度的仪器。它具有高灵敏度和高分辨率,可以测量微小体积的样品,并提供准确可靠的测量结果。本文将介绍
超微量分光光度计的使用方法,以帮助读者正确操作该仪器。
首先,使用
超微量分光光度计前,需要进行仪器的预热和校准。打开仪器电源,预热一段时间,通常为15-30分钟,以确保仪器的稳定性。然后,进行光程校准,将空白溶液(不含待测样品)放入样品槽中,调节光程使得光束通过样品槽的路径长度达到设定值。
接下来,准备待测样品。将样品溶液转移到透明的石英或玻璃比色皿中,确保样品的纯度和浓度符合实验要求。如果需要,可以进行样品的稀释或浓缩,以使其浓度适合仪器的检测范围。
然后,设置仪器参数。选择适当的检测波长,通常为蛋白质吸光度峰值的波长,常见的是280nm。根据实验需要,选择合适的光程长度,通常为1cm。调节仪器的光程和波长设置,确保仪器与待测样品的要求相匹配。
在样品槽中放入空白溶液(作为参考),然后将待测样品放入另一个样品槽中。确保样品槽中没有气泡或杂质,以免影响测量结果的准确性。关闭样品槽盖,确保样品槽与光源之间没有漏光。
开始测量前,进行零点校准。选择仪器的零点功能,通过读取空白溶液的吸光度值将其设为零点。这样可以消除仪器本身的漂移和背景吸光度的影响。
接下来,测量待测样品的吸光度。选择仪器的读取功能,记录样品的吸光度值。确保测量时间足够长,以获得稳定的读数。如果需要,可以进行多次测量并取平均值,以提高结果的准确性。
最后,根据吸光度值计算蛋白质的浓度。使用比尔-朗伯定律的公式,将吸光度值转换为蛋白质的浓度。根据实验所用的标准曲线或浓度系列,进行计算并得出结果。
使用超微量分光光度计时,还应注意以下几点。首先,避免样品的污染和交叉污染,使用洁净的工具和容器进行操作。其次,及时清洗仪器,以防止残留物对下次测量的影响。最后,根据实验要求和仪器的规格,合理选择样品的体积和浓度范围。
总之,
超微量分光光度计是一种重要的工具,用于测量生物样品中蛋白质的浓度。正确的使用方法包括预热和校准仪器,准备样品,设置仪器参数,进行零点校准,测量样品吸光度,并计算蛋白质浓度。遵循正确的操作步骤和注意事项,可以获得准确可靠的测量结果。
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