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AKTA蛋白纯化系统的一般操作

AKTA蛋白纯化系统的一般操作:
1、开机
按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮,打开色谱系统,然后打开电脑电源。待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。双击桌面上UNICORN图标,进入操作界面。UNICORN的操作界面分为四个窗口(Fig 3)
                                                                    Fig 3、Unicorn的操作界面
2、准备工作溶液和样品
所有的工作溶液和样品需要经过0.45μm的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂(如乙腈、甲醇),需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备
首先将A泵的进液管道(A1)放入缓冲液或平衡液中,将B泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中,在system control窗口点击工具栏内的manual,选择 pump→pump wash explorer,选中A1,B1管道为ON, execute。泵清洗将自动结束。(Fig 4)

                                                                    Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗操作
4、安装层析柱
在manual里选择pump→flow rate,输入一定的低流速(Fig 5),insert;选择Alarm&mon→alarm pressure,设置high alarm(输入填料或层析柱的耐受压力,以较低者为设置值,具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到),insert,execute(Fig 6) 。待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。

                                                                      Fig 5、AKTA Explorer的流速设定操作


                                                                  Fig 6、AKTA Explorer的限压设定操作
5、开始纯化:
1)在柱子平衡好之后(电导,pH的数值和变化趋势稳定)即开始上样了。此时应将紫外调零(Fig 7),选择Alarm&mon→autozero,exectue。

                                                                  Fig 7、AKTA Explorer的紫外调零操作
2)具体上样方式:AKTA系统的上样方式比较灵活,可以根据具体样品的条件进行上样,包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等,这里以用系统泵上样为例简单介绍上样过程。点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
3)洗脱:上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual里选择pump→gradient,
按照自己的工艺选择targetB(100%)和length(10CV)(Fig 8)。

                                                                    Fig 8、AKTA Explorer的洗脱条件设定操作
4)设定收集:选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积,exectue(Fig 9)。结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900,exectue(Fig 10)

                                                                   Fig 9、AKTA Explorer的组分收集设定操作


                                                                   Fig 10、AKTA Explorer的组分收集停止设定操作
5)清洗泵及卸下层析柱:
将A1和B1入口放入纯水中,启动pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20%乙醇中,同样操作将乙醇冲满整个管路保存。再给柱子一个慢流速,设置系统保护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时候将堵头拧上,再拆柱子的上端,再拧上上端的堵头。整个过程中应防止气泡进入。
6)关闭电源:
从软件控制系统的开始一个窗口unicorn manager点击退出,其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA主机电源,关闭电脑电源。

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